Bull. Fukuoka Agric. Res. Cent.

イムノカプチャー逆転写遺伝子増幅法（ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ）によるカンキツからのリンゴステムグルービングウイルスの検出

［摘要］カンキツのリンゴステムグルービングウイルス（ＡＳＧＶ）検定において，酵素結合抗体法（ＥＬＩＳＡ）で判定が困難な試料の再検定に，イムノカプチャー逆転写遺伝子増幅法（ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ）の適用を検討した。ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲは，ＥＬＩＳＡよりも高感度の検出が可能であり，新規に作製したプライマーＣＴＬＶ－ＣＰ２（＋）を用いるとさらに100倍以上検出感度が向上した。ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲは，ＲＴ－ＰＣＲと比較して，核酸の抽出操作が不要であること，ＥＬＩＳＡに供試した磨砕汁液の利用が可能であることから，ＥＬＩＳＡ再検定が簡易かつ迅速に実施可能であると考えられた。また，ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲは，ＥＬＩＳＡで判定が困難な発芽３カ月後の新芽をはじめ，旧葉，樹皮からもＡＳＧＶの検出が可能であったことから，ＥＬＩＳＡ検定に適さない時期の試料もＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲによって検定できることが示唆された。
　以上のことから，カンキツからのＡＳＧＶの検定においては，ＥＬＩＳＡとＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲを組み合わせて実施することで，迅速かつ高精度な検定が可能であると考えられた。

［キーワード：カンキツ、リンゴステムグルービングウイルス、ＥＬＩＳＡ、ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ］

　Detection of Apple Stem Grooving Capillovirus by Immunocapture Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction in Citrus. SHIMOMURA Katsumi and Nario Kusano (Fukuoka Agric. Res. Cent., Chikushino, Fukuoka 818-8549, Japan) Bull. Fukuoka Agric. Res. Cent. 21: 87-91(2002)

　Apple stem grooving virus (ASGV), known to be a pathogen of the bud-union creases in citrus trees grafted on trifoliate orange rootstock, can be detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) easily and immediately if there is a sufficient number of virus particles in the plant or sample. Unfortunately, ASGV is often not detectable by ELISA because low numbers of particles are present. We designed new forward primers on the basis of the nucleotide sequences of coat protein regions of several strains of ASGV and examined whether immunocapture reverse transcription polymerase chain reaction (IC-RT-PCR) was useful or not for the diagnosis of ASGV against samples that couldn't be judged by ELISA. We were able to detect ASGV using either RT-PCR or IC-RT-PCR. The detection ability of RT-PCR was 100 times higher when we used the new forward primer [CTLV-CP2(+):5'-AGGCAGAACTCTTTGAACGA-3']. ASGV was detected by IC-RT-PCR using the new primer in the saps from new leaf and bark, two-year-old leaf and bark at three months after sprouting, but it was not detected by ELISA. IC-RT-PCR using CTLV-CP2(+)was very useful and efficient for rechecking for ASGV. This method could detect ASGV immediately because it could be performed without the extraction of RNAs from samples.