福岡県農業総合試験場研究報告22(2003) pp 56 - 60
福岡県のパプリカ（Capsicum annuum）におけるトマト黄化えそウイルス（Tomato spotted wilt virus：TSWV）の発生およびDot Immuno-Binding Assay（DIBA）法による検出
石井貴明・奥田 充・花田 薫・嶽本弘之
（生産環境研究所）
福岡県のパプリカ栽培圃場においてえそ輪紋症状を呈する株を5種類の植物ウイルス抗体を用いて検定したところ， 本病はトマト黄化えそウイルス（TSWV）によるものであることが明らかとなった。福岡県においてTSWVの発生は未確認であったため，分離したTSWVの性質について検討した。 ウイルス分離株の指標植物に対する反応を調べたところ，供試した6科16種の植物すべてに感染し，既報のTSWVとの相違点は認められなかった。 また，RT-PCR法でSRNAにコードされるinternal transcribed spacer（ITS）領域およびヌクレオキャプシドタンパク質遺伝子（N遺伝子）を含む領域をそれぞれ増幅し，それぞれの塩基配列を決定した。ITS領域にはトスポウイルス属に特有のA-Uに富む配列を認めた。また，得られたN遺伝子の塩基配列から推定されたアミノ酸配列はTSWV（普通系統）であるBR-01株と98.1%の相同性を有していた。以上の結果からウイルス分離株をTSWV（普通系統）と同定した。市販の交代を利用したDIBA法によるTSWVの検出についてピーマン，タバコ，トマト，ナスの発病葉を対象に検討した結果，すべて陽性反応を示した。また，酵素標識した抗TSWV抗体を1次抗体とする変法により所要時間の短縮化が可能であることが示唆され，本法およびその変法がTSWVの簡易検定に利用できることが確認された。
[キ−ワ−ド：トマト黄化えそウイルス，パプリカ，DIBA法，簡易診断]
Occurence of Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV) of Pepper in Fukuoka Prefecture and its Detection of TSWV with application of Dot Immuno-Binding Assay (DIBA). Ishii Takaaki, Mitsuru Okuda , Kaoru Hanada and Hiroyuki Takemoto (Fukuoka Agricultural Research Center, Chikushino, Fukuoka 818-8549, Japan)Bull. Fukuoka Agric. Res. Cent., 22: 56 - 60 (2003)
Unidentified necrotic ringspot disease was found on paprika(Capsicum annuum)plants in Fukuoka Prefecture. Because the symptoms suggested a viral infection, some diseased leaves were tested with antibodies against Cucumber mosaic virus, Pepper mild mosaic virus, Potato virus X, Potato virus Y and Tomato spotted wilt virus using DAS-ELISA. Positive reactions were observable only with anti-TSWV antibodies. An isolate was obtained by application of a local lesion isolation method using a Chenopodium quinoa plant. The host range of the isolate was identical with that of TSWV, in the 16 plant species in 6 families tested. The nucleotide sequence of the nucleocapsid protein gene(N gene) was identified. The deduced amino acid sequence of the N gene was found to have a homology of 98.1% with an ordinary TSWV strain BR-01 isolate. Therefore the paprika isolate was categorized as TSWV(Ordinary strain). The nucleotide sequence of the internal transcribed spacer region(ITS region)linked with the N gene of the paprika isolate was also determined, and the presence of an A-U rich region specific for tospovirus was confirmed. Leaves of pepper, tobacco, tomato and egg plant showing necrotic symptoms were examined to detect the virus with anti-TSWV antibodies using the DIBA method. Both the DIBA method and modified DIBA method using alkali-phosphatase-conjugeted IgG against TSWV were successfully identified TSWV from leaves with necrotic symptoms of plants. The modified DIBA method may be promising for effective means of diagnosing diseases of eggplant, which is one of a major vegetable crops in Fukuoka prefecture.
[Key words: Tomato spotted wilt virus, Paprika(Capsicum annuum), DIBA, simplified diagnosis]
