福岡県農業総合試験場24(2005) pp73−77
ウシ体外成熟卵子のガラス化保存におけるガラス化液の
シュクロース濃度およびフィルターを支持体とした保存手法
森美幸・笠正二郎・上田修二
(家畜部)
ウシ体外成熟卵子のガラス化保存について検討した。マイクロドロップレット法において,エチレングリコールとシュクロースを耐凍剤としたガラス化液のシュクロース濃度(1M vs 0.67M)を比較した。体外受精後2日目における胚分割率(27.7% vs 38.0%)および 7日目における胚発生率(0.0% vs 4.0%)において,0.67Mの方が1Mに比べて有意に高かった。メンブレンフィルターを用いたフィルター法と,マイクロドロップレット法の比較を行った。ガラス化液平衡処理の所要時間は,マイクロドロップレット法では卵子の個数が増えるに従い長くなったが,フィルター法では変わらなかった。また,保存卵子の体外受精後2日目における胚分割率および,7日目に胚盤胞,8日目に拡張胚盤胞へ発育した割合に有意差はなかったものの,フィルター法がマイクロドロップレット法より高くなる傾向が認められた。これらのことから,卵子のガラス化保存においては,ガラス化液の耐凍剤としてエチレングリコールと組み合わせるシュクロース濃度が保存卵子の生存性に影響を及ぼすことが明らかとなった。また,フィルター法を用いることにより,一度により多くの数の卵子を保存することが可能となった。
[キーワード:ウシ,卵子,ガラス化,シュクロース,フィルター法]
The Effect of Sucrose in Vitrification Solution and the Use of a Membrane Filter in Vitrification. MORI Miyuki, Shojiro KASA and Shuji UEDA(Fukuoka Agricultural Research Center, Chikushino, Fukuoka818-8549, Japan)Bull. Fukuoka Agric. Res. Cent. 24:73-77(2004)
Experiments were conducted on the vitrification of in vitro matured bovine oocytes. The effect of the concentration of sucrose (1M, 0.67M) in vitrification solutions consisting of a cryoprotectant (ethylene glycol and sucrose) was compared in micro-droplets. The results showed that the cleavage rates on day 2 were 27.7% and 38.0% respectively; and the rates of development to blastocysts on day 7 were 0.0% and 4.0% respectively. This attested to the fact that 0.67M in vitro fertilization was significantly higher than 1M (p<0.05). The filter method, which makes use of a membrane filter, was compared with micro-droplets. In the micro-droplets, it took a long time to complete an equilibration treatment in the vitrification solution as the number of oocytes increased, but the filter method was not affected. The cleavage rates on day 2 and rates of development to blastocysts on day 7 and expanded-blastocysts on day8 did not differ significantly, but the filter method tended to have a higher rate than the micro-droplets. Thus, it was considered that the concentration of sucrose used with ethylene glicol as a cryoprotectant favorably influenced the survival of vitrified bovine oocytes. Also, more numbers of oocytes couldbe vitrified at one time using the filter method.
[Keywards:bovine, oocyte, vitrification, sucrose, filter method]